师弟师姐，我新染的免疫荧光片子，为什么外圈细胞比内圈的要亮呢？你这细胞密度过高都连成片了，爬片做的也不好，加上染料接触细胞的面积也不同，就会出现这样的结果。
师姐师弟啊，密度太高吗？之前我掉片儿也是密度太高导致的……对啊！还有你之前忘记把玻片密封好，玻片接触空气湿度大黏连了很难分开，罚你这周刷瓶子！师姐师弟呜呜呜好的……要是培养皿里能直接做细胞免疫荧光就好了免疫荧光技术应用广泛，不过传统的免疫荧光实验经常会遇到爬片效果欠佳、染液分布不均以及操作繁琐，费时费力等难题。
不要怕，今天给大家送上一体化的「培养室-固定-染色-成像」免疫荧光解决方案！Ibidi 一体化免疫荧光染色载玻片无需包被爬片，快速染色无渗漏节省试剂与细胞▼ 扫码立即 0 元试用 ▼一体化免疫荧光有什么优势？无需包被爬片，一个盒子搞定全部实验一体化免疫荧光含有 8/18 个独立的开放小室，「All-in-one」小室可以直接用来做细胞培养和显微观察。
这种腔式载玻片/培养皿，不需要包被，不需要爬片。
培养细胞－冲洗玻片－固定细胞－染色－成像，所有步骤都在这个载玻片就可以成。
光学效果极佳，适合各种显微镜No.1.5 聚合物盖玻片底部非常适合进行高分辨率成像，具有极佳光学效果，适用于各种显微镜技术（如 DIC、宽场荧光、共聚焦显微镜、双光子显微镜、FRAP、FRET、FLIM 和 LSFM）。
以下是今年发表在《Cell Biology and Disease》杂志的文章，使用一体化免疫荧光技术对 U2OS 细胞进行的染色图片，质量高、清晰美观，助力高质量论文发表[1]。
还有最重要的一点，价格经济实惠，仅需少量的细胞和试剂就能出结果，可以帮大家节省大量科研经费。
Ibidi 一体化免疫荧光如何操作？下面介绍一个使用 ibidi μ-Slide 8/18 孔载玻片培养和染色贴壁细胞的详细实验方案。
培养大鼠成纤维细胞，用多聚甲醛固定，再用线粒体染料 MitoTrackerDAPI 对细胞核进行复染。
最后经过一抗和二抗染色，通过免疫细胞化学探测其他细胞内结构。
该应用包括四个主要步骤：在我们的示例中，我们使用了以下材料：荧光显微镜（倒置），带有适当的滤光片组。
培养在无菌条件下打开 ibidiμ-Slide 8 孔载玻片 ibiTreat（80826），将其放在 μ-Slide Rack（80003）或适当的平面上。
准备细胞悬液（5 x 104 细胞/ mL），并在 µ-Slide 8 孔载玻片每个孔中加入 300 µL 盖上盖子。
将载玻片放入培养箱（37°C；5 ％CO2）中，让细胞附着。
培养至少 3 小时或过夜。
Tip：对于更长的细胞培养，建议几天后进行对细胞进行换液。
固定，渗透和封闭使用细胞培养抽吸装置从孔中吸出细胞培养基，将 300 µL 缓慢加入每个孔 Dulbecco PBS 清洗细胞。
用约 150 µL 2％ paraformaldehyde 固定细胞 20 分钟，之后吸出液体并涂抹 150 μL 的0.1％Triton®X-100，10 分钟后吸出液体并用 300 μL BSA 封闭液洗涤细胞。
染色准备染色液和抗体溶液，使用 150 μL DAPI 溶液并在室温下培养 30 分钟，用 300 μL BSA 封闭溶液洗涤细胞两次。
使用 150 μL MitoTracker 溶液并培养 45 分钟，用 300 μL BSA 封闭溶液洗涤细胞两次后吸出，再逐滴添加约 150 μL 的 ibidi 安装介质。
成像在荧光显微镜下用合适的滤光片组观察细胞，并可选择用 ibidi 浸油（＃50101）观察细胞，（可选）覆盖图像以创建合并图像。
无需包被爬片，快速染色无渗漏，节省试剂与细胞，加速你的实验进程，助力科研成果快速发表。
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记者 隋雅逸 畅新儿 须娟妍
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